原代細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的問(wèn)題有哪些

　　根據(jù)傳統(tǒng)定義，通過(guò)自組織收集和接種的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞。這些細(xì)胞直接與組織分離，生命周期有限，經(jīng)過(guò)幾次傳代后逐漸停止生長(zhǎng)。原代細(xì)胞需要在有限的生命周期內(nèi)獲得細(xì)胞生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群的基因型和表型一致性。

　　細(xì)胞系是一組不斷生長(zhǎng)分化的細(xì)胞，其基因改造具有無(wú)限的生長(zhǎng)潛力。體外培養(yǎng)的細(xì)胞系用于醫(yī)學(xué)或科學(xué)研究。

　　倍增和代數(shù)有什么區(qū)別?

　　倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍，通常指的是細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。代數(shù)是細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中取出的次數(shù)和傳代過(guò)程，傳代的目的是保持細(xì)胞密度低，促進(jìn)進(jìn)一步增殖。

　　接收到的凍存細(xì)胞該如何處理?

　　收到包裝后，立即將冷凍保存的細(xì)胞從干冰轉(zhuǎn)移到液氮中并冷凍保存。該過(guò)程盡可能快地完成以避免加熱。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80°C，因?yàn)樗鼈儠?huì)對(duì)細(xì)胞造成無(wú)法修復(fù)的損壞。

　　如何開(kāi)始培養(yǎng)冷凍細(xì)胞?

　　(1) 從液氮罐中取出裝有細(xì)胞的管子，注意保護(hù)手和眼睛。

　　(2)將凍存管迅速放入37℃水浴中，輕輕旋轉(zhuǎn)，直至管內(nèi)內(nèi)容物完全融化。

　　(3) 立即將冷凍管從水箱中取出，擦干，轉(zhuǎn)移到無(wú)菌環(huán)境中。

　　(4) 用 70% 酒精清洗冷凍管并擦去多余的酒精。

　　(5)打開(kāi)蓋子注意不要碰到里面的螺紋(低溫恒溫管的負(fù)壓在打開(kāi)蓋子時(shí)可能會(huì)造成少量溢出，但這是正常操作)。

　　(6) 用聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶(或參照說(shuō)明書)。大多數(shù)細(xì)胞的推薦接種密度為每平方厘米 5000 個(gè)細(xì)胞。

　　(7) 蓋上培養(yǎng)瓶蓋，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞分布均勻。如果需要換氣，可以打開(kāi)蓋子。

　　(8) 將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中(37°C，5% CO2，95%空氣)。

　　(9) 放入培養(yǎng)箱后6～16小時(shí)，換液一次，去除殘留的二甲亞砜和未貼壁的細(xì)胞。