列舉細胞生長緩慢的兩大原因

　　就一個實驗室而言無論運作的多么好，總會因為革新技術(shù)或拓展方向二影響原來的流程，從而產(chǎn)生各種各樣的問題。有些地方錯誤的操作有可能帶來嚴重的后果，那么今天主要列舉細胞生長緩慢的兩大原因。

　　一、培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題

　　1.檢查你所培養(yǎng)的細胞是否存在污染。

　　(1)如果培養(yǎng)細胞未添加抗生素，細胞污染則是不可避免的。

　?、佟∮萌庋酆惋@微鏡進行檢查。

　?、凇∪绻毎晃廴緞t要棄掉。

　　(2)由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測。

　　(3)檢測可能污染的途徑和原因。

　　2. 檢查細胞生長所用的培養(yǎng)基和血清(例如，不同批次或不同制造商)。如果您每天使用粉末或 10x 防腐劑，并將您當前購買的培養(yǎng)基更換為 1x 液體，您會發(fā)現(xiàn)問題是由這個引起的。

　　3.如果問題與介質(zhì)無關(guān)，則可能仍然是蜂窩問題。

　　(1) 復(fù)蘇另一個冷凍保存的細胞，并將其與培養(yǎng)中的細胞進行比較。應(yīng)將兩種類型的細胞的培養(yǎng)物分開，以避免在培養(yǎng)開始時受到污染。然后，按照步驟 (2) 至 (4) 檢查以下內(nèi)容：

　　(2) 對傳代細胞進行計數(shù)，繪制生長曲線，與上次培養(yǎng)細胞的數(shù)據(jù)進行比較，確認以下變化。

　　①　傳代時是否接種密度過低。

　　②　細胞傳代是否過于頻繁。

　　③　傳代前細胞平臺期是否過長。

　　(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號，檢查批號和供貨商。

　　(4)是否細胞分離過程中嚴重損傷了細胞，應(yīng)檢測:

　?、佟∫鹊鞍酌?其他消化試劑)消化時間是否過長。

　?、凇∠旱臐舛群突钚允欠襁^高、過強。

　?、邸∫鹊鞍酌赶瘯r，孵箱溫度是否過高。

　?、堋〈荡蛳毎麜r是否過于用力。

　?、荨〖毎欠駥?EDTA過于敏感(如果添加了EDTA)。

　　⑥　胰蛋白酶稀釋是否有誤。

　?、摺∈欠袷褂昧艘慌淤|(zhì)的胰蛋白酶消化液。

　　二、檢查共用的設(shè)備和試劑

　　溫室和孵箱溫度

　　(1)溫度和溫度設(shè)定不準。

　?、佟∽詣诱{(diào)溫器損壞。

　?、凇￠_關(guān)孵箱門過于頻繁。

　?、邸》跸溟T未關(guān)緊。

　?、堋★L扇損壞造成散熱不均。

　　(2)孵箱濕度不能維持

　?、佟∷P中未加水。

　?、凇》跸溆袧B漏。

　?、邸￠_關(guān)孵箱門過于頻繁。

　?、堋≡赑etri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBSA，每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。

　　(3)孵箱的CO2濃度不準

　?、佟￠_關(guān)孵箱門過于頻繁。

　?、凇O2控制器出現(xiàn)問題。