細(xì)胞增殖
一、服務(wù)簡(jiǎn)介：
細(xì)胞增殖檢測(cè)常見(jiàn)方法包括：細(xì)胞計(jì)數(shù)法、MTT法、CCK-8法、EdU和BrdU法。流式檢測(cè)增殖常見(jiàn)的有EdU和BrdU法。
二、樣本要求和實(shí)驗(yàn)流程：
- 細(xì)胞接種：在培養(yǎng)板中接種細(xì)胞懸液，每組細(xì)胞設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至合適的密度（37℃, 5% CO2）；
- 細(xì)胞處理：按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)給予細(xì)胞不同處理，如藥物或培養(yǎng)條件變化；
- 細(xì)胞培養(yǎng)：將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：24或48小時(shí)）；
- 用完全培養(yǎng)基將EdU稀釋為20μM的工作液，向培養(yǎng)板中加入EdU工作液，使其濃度為10μM，該濃度適用于大部分細(xì)胞；
- 將細(xì)胞置于37℃培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間（約2h）；
- 完成標(biāo)記后，去除培養(yǎng)基，用PBS洗滌1-2次；
- 每孔加入50μL 4%多聚甲醛固定細(xì)胞10-15min；
- 去除固定液，PBS洗滌細(xì)胞3次，每次3-5 min；
- 每孔加入通透液（含Triton X-100的PBS），室溫孵育10-15min；
- 去除通透液，PBS洗滌細(xì)胞1-2次，每次3-5 min；
- 根據(jù)EdU反應(yīng)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行熒光標(biāo)記；有需要可同時(shí)使用DAPI等核染料進(jìn)行細(xì)胞核染色；
- 通過(guò)熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀等檢測(cè)有熒光標(biāo)記的EdU陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)算其占細(xì)胞總數(shù)的比例，以評(píng)估細(xì)胞增殖水平。
注意事項(xiàng)：
1. EdU孵育時(shí)間應(yīng)根據(jù)細(xì)胞周期長(zhǎng)度和增殖速度適當(dāng)調(diào)整；
2. 確保染色過(guò)程嚴(yán)格避光，以保護(hù)熒光信號(hào)；
3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的熒光，避免撞色；
4. 稀釋EdU需使用完全培養(yǎng)基，使細(xì)胞保持正常的增殖狀態(tài)。
