細胞增殖
一、服務(wù)簡介：
細胞增殖檢測常見方法包括：細胞計數(shù)法、MTT法、CCK-8法、EdU和BrdU法。流式檢測增殖常見的有EdU和BrdU法。
二、樣本要求和實驗流程：
- 細胞接種：在培養(yǎng)板中接種細胞懸液，每組細胞設(shè)置3個復孔。將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至合適的密度（37℃, 5% CO2）；
- 細胞處理：按照實驗設(shè)計給予細胞不同處理，如藥物或培養(yǎng)條件變化；
- 細胞培養(yǎng)：將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：24或48小時）；
- 用完全培養(yǎng)基將EdU稀釋為20μM的工作液，向培養(yǎng)板中加入EdU工作液，使其濃度為10μM，該濃度適用于大部分細胞；
- 將細胞置于37℃培養(yǎng)箱中孵育適當時間（約2h）；
- 完成標記后，去除培養(yǎng)基，用PBS洗滌1-2次；
- 每孔加入50μL 4%多聚甲醛固定細胞10-15min；
- 去除固定液，PBS洗滌細胞3次，每次3-5 min；
- 每孔加入通透液（含Triton X-100的PBS），室溫孵育10-15min；
- 去除通透液，PBS洗滌細胞1-2次，每次3-5 min；
- 根據(jù)EdU反應檢測試劑盒說明進行熒光標記；有需要可同時使用DAPI等核染料進行細胞核染色；
- 通過熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡或流式細胞儀等檢測有熒光標記的EdU陽性細胞，計算其占細胞總數(shù)的比例，以評估細胞增殖水平。
注意事項：
1. EdU孵育時間應根據(jù)細胞周期長度和增殖速度適當調(diào)整；
2. 確保染色過程嚴格避光，以保護熒光信號；
3. 根據(jù)實驗需求選擇合適的熒光，避免撞色；
4. 稀釋EdU需使用完全培養(yǎng)基，使細胞保持正常的增殖狀態(tài)。
