簡單介紹下原代細胞的提取方法

　　原代細胞是通過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環(huán)境條件下分離的細胞在體外或其他人體和動物體內(nèi)生長。

　　原代細胞的提取方法詳細步驟：

　　1)所有操作應(yīng)在干凈通風(fēng)的超凈工作臺下進行，所有設(shè)備均應(yīng)進行高壓滅菌。

　　2) 根據(jù) BALB/c 小鼠的體重，使用 10 ml/kg 的 3% 戊巴比妥鈉麻醉，并將小鼠置于含有 75% 乙醇的燒杯中。這一步不僅可以對鼠標進行消毒，還可以制作體毛。它被浸濕，在隨后的剃須過程中不會粘在剪刀或紙巾上。

　　3) 用鑷子輕輕抬起小鼠心臟，將裝有PBS的注射器插入心尖，在右心耳處切開一個小口，慢慢推動注射器，隨著心臟的跳動，將體內(nèi)的血液沖洗出來。

　　4) 取出小鼠肺組織，將肺組織切成小米粒大小，放入預(yù)冷的HBSS中，反復(fù)洗滌數(shù)次。

　　5) 將小米大小的肺組織放入培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天，用1%的明膠溶液在4°C下過夜，將培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)瓶中。(將溫度恢復(fù)到37度)，放入37度培養(yǎng)箱消化4小時。

　　6)消化4小時后，加培養(yǎng)基(加普通培養(yǎng)基的兩倍量)繼續(xù)培養(yǎng)24小時(培養(yǎng)時間可根據(jù)細胞粘附情況調(diào)整)。

　　7)24小時后，取出肺組織，顯微鏡下觀察細胞情況，交換體液。

　　8) 原電池的提取和培養(yǎng)是一個非常緩慢的過程。在顯微鏡下通常需要 24 小時才能看到小細胞群，而卵石排列只能在一兩周內(nèi)看到。

　　9)當內(nèi)皮細胞長成單層時，會發(fā)生接觸抑制，所以每2-3天更換一次原電池。因此，內(nèi)皮細胞可以在接近單層時傳代。不要等到內(nèi)皮細胞非常飽滿。